CHES缓冲剂的配置方法及应用
发布时间：
2022-03-15
CHES缓冲剂，中文名称2-环己胺基乙磺酸，是一种偶极离子（两性离子） Good's 缓冲液，在相对较高的 pH 值（高达 10）下使用。它可用于包括酶学在内的多个生物学研究领域，还可研究高于生理 pH 范围的反应、蛋白质稳定化、甘露聚糖酶活性测定、DNA 消化和 2'-脱氧腺苷 3'-单磷酸标记，并作为 Wilson 和 Horne 提取缓冲液的成分。另外在电泳实验中应用也很常见，它与大多数金属离子反应性低。由此可见它在各种生化、分子生物学和分子诊断应用中的多用性。
CHES缓冲剂在25℃时PKA值为9.3左右，粉末水溶性好，15克的CHES粉末可溶解在85ml的水中，可使用氢氧化钠来调节PH值，因为它在水中是呈酸性的，所以需要用氢氧化钠来调节PH至8.6-10。
实验配置方法如下：
- 称取CHES 1.036 g (MW=207.3 g/mol)，加入40 mL纯水；
- 测40 mL CHES水溶液的pH值为4.50，测试温度为27℃；
- 加入1 mL 1 M NaOH溶液后，测试pH值为8.83；
- 加纯水定容至50 mL，转移到50 mL样品瓶中，室温下保存。
根据以上方法可配制出pH在9.0左右的CHES缓冲溶液母液，在实验的过程中，pH在8.83左右，但会有一点偏差，接近于9.0，符合实验要求。在配置时为了在实验过程中得到可靠的数据，实验细节很重要，所以在实验中需要的基础知识还需要认真地对待。
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