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鲁米诺和吖啶酯在化学发光应用中的不同

发布时间：

2020-05-20

众所周知，国内IVD市场对免疫类检测需求量日益增大，各类免疫检测类产品层出不穷，化学发光作为一种检测结果较为准确的方法学，已逐渐替代ELISA免疫检测。化学发光依据方法可以分为：直接化学发光法，酶促化学发光，以及电化学发光法。而鲁米诺和吖啶酯分别应用于酶促化学发光和直接化学发光。今天我们就来讨论一下鲁米诺和吖啶酯在化学发光中应用的不同。

化学发光酶法免疫测定

化学发光酶免疫测定（CLEIA）是采用化学发光剂作为酶反应底物的酶标记免疫测定。经过酶和发光两级放大，具有很高的灵敏度。以过氧化物酶为标记酶、以鲁米诺为发光底物、并加入发光增强剂以提高敏感度和发光稳定性。应用的标记酶也可以为碱性磷酸酶，发光底物为dioxetane磷酸酯，固相载体为磁性微粒。

鲁米诺化学发光

直接化学发光免疫测定

化学发光免疫测定（CLIA），是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的一类免疫测定方法。吖啶酯是较为理想的发光底物，在碱性环境中即可被过氧化氢氧化而发光。用作标记的化学发光剂应符合以下几个条件：

1.能参与化学发光反应。

2.与抗原或抗体偶联后能形成稳定的结合物试剂。

3.偶联后仍保留高的量子效应和反应动力。

4.应不改变或极少改变被标记物的理化特性，特别是免疫活性。

整体来讲，鲁米诺类和吖啶酯类发光剂等均是常用的标记发光剂。鲁米诺作为酶促化学发光底物与辣根过氧化物酶一起用于间接化学发光，发光的峰值波长为425nm。其反应的特点是：酶的灵敏度高，稳定性较好。但是缺点在于，激发时间较长造成速度相对较慢，标记过程中可能遮掩抗体反应位点。目前用这种方法的有安图生物等。吖啶酯作为直接发光标记物，需要在含H₂O₂的碱性条件下进行。发光的峰值波长为430nm。其反应特点是：发光体系简单快速，5s内完成发光，且不需要催化剂，但吖啶酯在缓冲盐中不稳定，容易水解。

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核磁共振（NMR）用于吖啶酯的结构确证，可验证分子骨架与官能团排布，但无法量化纯度、发光效率、偶联活性及重金属残留等关键性能指标。完整品质评估需组合多种检测手段：HPLC量化纯度，功能学测试（发光效率、偶联活性、稳定性）评判实际使用价值，理化与杂质检测把控安全底线。四类检测互为补充，缺一不可。采购时应核验全套COA数据，避免仅凭核磁图谱判定品质，以防结构合格但性能不达标的采购风险。