Tris与Tris-HCl和Tris-EDTA之间的三角恋
发布时间：
2020-07-30
Tris： 三羟甲基氨基甲烷
三羟甲基氨基甲烷（Tris）是一种有机化合物，其分子式为(HOCH 2) 3CNH 2。Tris被用于生物化学和分子生物学实验中的缓冲液的制备。在生物化学实验中用的TAE和TBE缓冲液（用于核酸的溶解）都需要用到Tris。在它含有氨基的情况下可以与醛发生缩合反应。缓冲特性Tris为弱碱，在室温（25℃）下，它的pKa为8.1；根据缓冲理论，Tris 缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0到9.2之间。
Tris 碱的水溶液pH在1 0.5左右，一般加入盐酸以调节 pH 值到所需值，即可获得该pH值的缓冲液。但同时应注意温度对于Tris的pKa的影响。
由于Tris缓冲液为弱碱性溶液，DNA在这样的溶液中会被去质子化，从而提高其溶解性。人们常常在Tris盐酸缓冲液中加入EDTA 制成“TE 缓冲液”，TE 缓冲液被用于DNA 的稳定和储存。如果将调节pH值的酸溶液换成乙酸，则获得“TAE缓冲液”（Tris/Acetate/EDTA），而换成硼酸则获得“TBE 缓冲液”（Tris/Borate/EDTA）。这两种生物缓冲液常用于核酸电泳实验中。
1 M Tris-HCl (pH7.4， 7.6， 8.0)
组份浓度1M Tris-HCl
配制量1L
配制方法：
1 .称量121 .1g Tris置于lL烧杯中。
2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.按下表加入浓HCl量调节所需要的pH值。
pH值 浓HCl
7.4约 70ml
7.6约 60ml
8.0约 42ml
4.将溶液定容至1L。
5.高温高压灭菌后，室温保存。
注意： 应使溶液冷却到室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
1.5 M Tris-HCl (pH8.8)
组份浓度1.5M Tris-HCl
配制量1L
配制方法
1.称量181 .7g Tris置于1L烧杯中。
2.加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.用浓HCl调节pH值至8.8。
4.将溶液定容至1L。
5.高温高压灭菌后，室温保存。
注意： 应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，
温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
Tris-HCl 缓冲液的优点是：
①因为Tris碱的碱性较强，所以可以只用这一种缓冲体系配制pH范围由酸性到碱性的大范围pH值的缓冲液；
②对生物化学过程干扰很小，不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。
其缺点是：
①缓冲液的pH值受溶液浓度影响较大，缓冲液稀释十倍，pH值的变化大于0. 1；
②温度效应大，温度变化对缓冲液pH值的影响很大，即：△pKa／℃＝－0. 031，例如：4℃时缓冲液的pH＝8. 4，则37℃时的pH＝7. 4，所以一定要在使用温度下进行配制，室温下配制的 Tris-HCl 缓冲液不能用于0℃～4℃。
③易吸收空气中的 CO2， 所以配制的缓冲液要盖严密封。
④此缓冲液对某些pH电极发生一定的干扰作用，所以要使用与Tris溶液具有兼容性的电极。
Tris 溶液可从空气中吸收二氧化碳， 保存时注意密封，如果要求无菌，可以加叠氮钠 。
TE 即 Tris-EDTA buffer （10mM Tris， 1mM EDTA， pH7.4 pH7.6 pH8.0）。
常用分子生物学试剂，用于DNA的溶解等。
配制1 0×TE Buffer (pH7.4, 7.6， 8.0)
组份浓度：100mM Tris-HCl，10mM EDTA
配制量：1L
配制方法：
1.量取下列溶液，置于lL烧杯中。
1M Tris-HCl Buffer(pH7.4， 7.6， 8.0) 100 ml
500 mM EDTA(pH8.0)20ml
2.向烧杯中加入约800ml 的去离子水，均匀混合。
3.将溶液定容至1L后，高温高压灭菌。
4.室温保存。
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